Microscòpia confocal d’escaneig

• Descripció

El microscopi làser scanning confocal Nikon TE 2000E és un  microscopi òptic invertit que a partir de la detecció de la fluorescència és capaç d'obtenir imatges tridimensionals. Ens elimina el senyal fluorescent provinent de la part de la mostra que està fora de focus, amb la qual cosa s'aconsegueixen, de manera no destructiva, seccions òptiques a diferents plans de la mostra. Aquestes seccions poden ser utilitzades per fer-ne una anàlisi tridimensional o per a l'observació d'una part interna de la mostra. 

La microscòpia confocal augmenta significativament la resolució òptica i el contrast de les imatges. Aquests avantatges la converteixen en una eina imprescindible quan cal obtenir imatges d'alta resolució i quan es duen a terme estudis de col·localització. 

Les seccions òptiques obtingudes per microscòpia confocal contenen la informació per poder fer posteriorment una anàlisi tridimensional: quantificació volumètrica, distribució de la fluorescència, anàlisi de la col·localització, etc

Pujar

• Tecnologia

El microscopi està equipat amb tres línies làser d'excitació. 488nm, 543nm i 633nm i quatre canals de detecció simultanis, els tres detectors de la fluorescència i un altre per a llum transmesa.

Com a font d'il·luminació disposa d'una làmpada de mercuri HBO100 per a la visualització de les mostres amb fluorescència; i llum transmesa per a camp clar i per al contrast d'interferència diferencial (DIC)

Per a visualitzar la mostra, aquest sistema està equipat amb els següents filtres:

• UV- Excitació BP 340-380; emissió LP 425) per a Alexa 405 o DAPI, etc. 
• Blau- Excitació BP 450-490; emissió LP 515) per a FITC, Cy2, etc.
• Verd- Excitació BP 515-560; emissió LP 590) per a TRITC, Cy3, etc. 
• Vermell Excitació 633; emissió (657/700) per a Alexa 633, etc.

Els objectius disponibles en aquest equip son: 

• HC PL APO CS 10X/0.4 DRY 
• HCX PL APO 20X/0.7 IMM
• HCX PL APO 20X/0.7 IMM (per a aigua o oli)
• HCX PL APO CS 40X/1.25 OIL 
• HCX PL APO 60X/ 1.4 OIL 
• HCX PL APO CS 100X/1.4 OIL

Pujar

• Aplicacions

• Anàlisi tridimensional en mostres biològiques: immunofluorescència en cèl·lules, teixits, biofilms, etc.
• Anàlisi tridimensional de la col·localització de fins a tres marcadors.
• Estudis de moviment (FRAP) o d'interacció (FRET) de molècules en teixits i cèl·lules.
• Estudis en cèl·lula viva: filmació a intervals (time lapse), mesura d'ions intracel·lulars, estudis en 4D.
• Ciències de materials: anàlisi de superfícies, perfilometria, paràmetres de rugositat, mapes de relleu.
• Anàlisi de cèl·lules in vivo i a temps real mitjançant marcadors i/o proteïnes de fusió fluorescents (GPF) i derivats.
• Estudis de col·localització, d'internització i trànsit intracel·lular.
• Anàlisi fisiològica de resposta de Ca2+.

Pujar

• Informació de seguretat

• No passar la mà pel camí dels làsers ni exposar-hi els ulls.
• Col·locar la mostra abans de connectar els làsers.
• No observar directament l'emissió del làser que incideix a la mostra.