Microscopía confocal de escaneo

• Descripción

El microscopio láser scanning confocal Nikon TE 2000E es un microscopio óptico invertido que a partir de la detección de la fluorescencia es capaz de obtener imágenes tridimensionales. Nos elimina la señal fluorescente proveniente de la parte de la muestra que está fuera de foco, consiguiendo, de manera no destructiva, secciones ópticas a diferentes planos de la muestra. Estas secciones pueden ser utilizadas para hacer un análisis tridimensional o para la observación de una parte interna de la muestra. 

La microscopia confocal aumenta significativamente la resolución óptica y el contraste de las imágenes. Estas ventajas la convierten en una herramienta imprescindible cuando hace falta obtener imágenes de alta resolución y cuando se realizan estudios de co-localización.  

Las secciones ópticas obtenidas por la microscopia confocal contienen la información para poder hacer posteriormente un análisis tridimensional: cuantificación volumétrica, distribución de la fluorescencia, análisis de la co-localización, etc.

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• Tecnología

El microscopio está equipado con tres líneas láser de excitación (488nm, 543nm y 633nm) y cuatro canales de detección simultáneos, los tres detectores de la fluorescencia y otro para la luz transmitida. 

Como fuente de iluminación dispone de una lámpara de mercurio HBO100 para la visualización de las muestras con fluorescencia; y luz transmitida para campo claro y para el contraste de interferencia diferencial (DIC).

Para visualizar la muestra, este sistema está equipado con los siguientes filtros:

• UV- Excitación BP 340-380; emisión LP 425) para Alexa 405 o DAPI, etc. 
• Azul- Excitación BP 450-490; emisión LP 515) para FITC, Cy2, etc.
• Verde- Excitación BP 515-560; emisión LP 590) para TRITC, Cy3, etc. 
• Rojo- Excitación 633; emisión (657/700) para Alexa 633, etc.

Los objetivos disponibles en este equipo son: 

• HC PL APO CS 10X/0.4 DRY 
• HCX PL APO 20X/0.7 IMM
• HCX PL APO 20X/0.7 IMM (para agua o para aceite)
• HCX PL APO CS 40X/1.25 OIL 
• HCX PL APO 60X/ 1.4 OIL 
• HCX PL APO CS 100X/1.4 OIL

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• Aplicaciones

• Análisis tridimensional en muestras biológicas: inmunofluorescencia en células, tejidos, biofilms, etc.
• Análisis tridimensional de la co-localización de hasta tres marcadores.
• Estudios de movimiento (FRAP) o de interacción (FRET) de moléculas en tejidos y células.
• Estudios en célula viva: filmación a intervalos (time lapse), medida de iones intracelulares, estudios en 4D.
• Ciencias de materiales: análisis de superficies, perfilometria, parámetros de rugosidad, mapas de relieve.
• Análisis de células in vivo y a tiempo real mediante marcadores y/o proteínas de fusión fluorescentes (GPF) y derivados.
• Estudios de co-localización, de internalización y de tránsito intracelular.
• Análisis fisiológico de respuesta de Ca2+.

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• Instrucciones de seguridad

• No pasar la mano ni exponer los ojos al camino óptico de los láseres.
• Colocar la muestra antes de conectar los láseres.
• No observar directamente la emisión del láser que incide en la muestra.